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開發(fā)一種用于分離E.albertii的新型改良選擇性培養(yǎng)基 CT-PS-XR-MacConkey瓊脂及其在食品樣品中的評估
2025-05-16 10:06:46
由于E.albertii的生化和遺傳特性與E. coli非常相似，其毒力基因譜與非典型腸致病性大腸桿菌（aEPEC）、腸出血性大腸桿菌（EHEC）、細(xì)胞致死性膨脹毒素II基因陽性大腸桿菌（CTEC-II）和鮑氏志賀氏菌血清型13的毒力基因譜相同，因此E.alberti經(jīng)常被誤認(rèn)為aEPEC、EHEC、CTEC-II和S.boydii。本研究的宗旨是開發(fā)出一種新型的E.albertii選擇性鑒別培養(yǎng)基，特異性分離E.albertii。
內(nèi)容
1.摘要
已知頭孢克肟和亞碲酸鹽已知能抑制大多數(shù)腸桿菌屬。有研究發(fā)現(xiàn)添加亞碲酸鹽抑制了E.albertii在LB肉湯中的生長，但在TSB中沒有。為了找到TSB中存在的積極因素，在胰蛋白胨、大豆蛋白胨，葡萄糖或缺的TSA平板上檢測E.albertii的生長。發(fā)現(xiàn)磷酸鹽、大豆蛋白胨和葡萄糖的缺乏確實降低了E.albertii的生長。然而，XRM-MacConkey瓊脂中沒有這些物質(zhì)，因此不會影響E.albertii的生長。總之，已經(jīng)開發(fā)出一種新型的E.albertii選擇性鑒別培養(yǎng)基，即含有頭孢克肟（C）、亞碲酸鹽（T）、磷酸鹽（P）和大豆蛋白胨（S）的XRM MacConkey瓊脂培養(yǎng)基（稱為CT-PS-XR-MacConkey瓊脂培養(yǎng)基），通過菌落顏色將E.alberti（無色）與E.coli（紅色）區(qū)分開來。
2.結(jié)果與討論
2.1頭孢克肟和亞碲酸鹽對E.coli和E.alberti生長的影響
如圖1所示，在頭孢克肟的存在下，兩株E.coli和三株E.alberti能夠在LB肉湯和TSB中生長。然而，在亞碲酸鉀的存在下，在LB肉湯中培養(yǎng)時，不僅E.albertii的生長受到抑制，E.coli的生長也受到抑制。有趣的是，E.coli在亞碲酸鉀存在的TSB中培養(yǎng)時無法生長，但E.albertii可以在TSB中生長。當(dāng)它們在頭孢克肟和亞碲酸鉀同時存在下的LB肉湯和TSB中培養(yǎng)時，也得到了類似的結(jié)果。這些數(shù)據(jù)可能表明，TSB中有一些積極因素，而這些因素在LB中不存在，有助于E.albertii在亞碲酸鉀的脅迫下生長。
表1評估了三株E.albertiis和兩株E.coli在TSA和XRM MacConkey上在存在或不存在頭孢克克肟和亞碲酸鈉的情況下的生長情況。實驗數(shù)據(jù)表明TSA含有一些未知因素，即使在頭孢克肟和亞碲酸鉀存在的情況下，也能促進E.albertii的生長，而XRM MacConkey瓊脂可能含有一些抑制E.alberti生長的抑制因素。
2.2 TSA 中促進 E. albertii 生長的積極因素篩選
與完整TSA相比，評估了三種E.albertii在四種TSA缺陷培養(yǎng)基上的生長情況（圖2）。數(shù)據(jù)表明，在亞碲酸鉀存在的情況下，磷酸氫二鉀、葡萄糖和大豆蛋白胨可能對E.albertii在TSA上的生長很重要，但胰蛋白胨可能會抑制E.alberti的生長。
在含有亞碲酸鉀和上述化合物的XRM MacConkey瓊脂上培養(yǎng)E.coli和E.albertii，證實了磷酸氫二鉀、葡萄糖和大豆蛋白胨對E.albertiis生長的重要性（表2）。
綜上所述，在單獨或同時存在頭孢克肟和亞碲酸鉀的情況下，大豆蛋白胨和磷酸氫二鉀的存在對于E.albertii在XRM MacConkey瓊脂上的生長和特異性分離非常重要，這可以抑制大腸桿菌和其他細(xì)菌的生長。
2.3選擇性分離培養(yǎng)基的評估
依據(jù)上述結(jié)果開發(fā)了一種改良的XRM MacConfey瓊脂，改良培養(yǎng)基含有50μg/L頭孢克肟、2.5mg/L亞碲酸鉀、2.5g/L磷酸氫二鉀和10.0g/L大豆蛋白胨，以及XRM MacConkey瓊脂的成分，并評估了培養(yǎng)基的敏感性（表3）。有趣的是，鼠傷寒沙門氏菌在XR MacConkey瓊脂上形成無色菌落，但在XRM MacConkey瓊脂上形成紅色菌落，且在CT-PS-XR-MacConkey瓊脂上不能生長，表明蜜二糖（M）可以從培養(yǎng)基中去除。因此，CT-PS-XR-MacConkey瓊脂被開發(fā)為E.alberti的選擇性分離培養(yǎng)基。
